Mida saab kasutada naatriumdeoksükolaadi asendajaks RIPApuhvris?

1. Mida teeb naatriumdesoksükolaat RIPA puhvris?
2. Mida lisate RIPA puhvrisse?
3. Kas lisate DTT RIPA puhvrisse??
4. Kas deoksükoolhape on sama mis desoksükolaat?
5. Kuidas valmistada naatriumdesoksükolaati 10?
6. Kuidas eemaldada naatriumdeoksükolaat?
7. Kas naatrium on desoksükolaat?
8. Kas naatriumdesoksükolaat on denatureeritud?
9. Kas RIPA puhver ühildub Elisaga?
10. Kuidas teha RIPA lüüsipuhvrit?
11. Mis on EDTA lüüsipuhvris?
12. Kuidas imetajate rakke lüüsida?
13. Miks lisatakse lüüsipuhvrisse DTT??

Mida teeb naatriumdesoksükolaat RIPA puhvris?

Järgmistel RIPA lüüsipuhvri komponentidel on järgmine toime: Tris-HCl on puhveraine, mis takistab valkude denaturatsiooni, NaCl on sool, mis takistab mittespetsiifilist valkude agregatsiooni, NP-40 on mitteioonne detergent valkude ekstraheerimiseks; Na-deoksükolaat ja SDS on ioonsed detergendid valkude ekstraheerimiseks; ja ...

Mida lisate RIPA puhvrisse?

RIPA lüüsipuhvri valmistamine: • 10 mM Tris-HCl, pH 8.0 • 1 mM EDTA • 0.5 mM EGTA • 1% Triton X-100 • 0.1% naatriumdesoksükolaat • 0.1% SDS • 140 mM NaCl • Lahjendada dH2O-ga • See lahus on toatemperatuuril stabiilne. Lisage 1 mM PMSF vahetult enne kasutamist.

Kas lisate DTT RIPA puhvrisse??

5. Redutseerija. Lisage PMSF lõppkontsentratsioonini 1 mM ja kõik muud proteaasi inhibiitorid vahetult enne kasutamist. 20% β-merkaptoetanooli (või 500 mM asendatud DTT-d) tuleks enne kasutamist värskelt lisada.

Kas deoksükoolhape on sama mis desoksükolaat?

Deoksükoolhapet tuntakse ka kui deoksükolaadi ja kolaanhapet. Deoksükoolhape emulgeerib rasvu, et soodustada nende soolest imendumist. Subkutaansesse rasvkoesse süstituna hävitab deoksükoolhape adipotsüüte (rasvarakud).

Kuidas valmistada naatriumdesoksükolaati 10?

10% naatriumdesoksükolaadi põhilahust (5 g 50 ml kohta) tuleb kaitsta valguse eest. 100 mM EDTA põhilahus valmistatakse 1.86 g 40 ml H2O-sse ja seejärel lisage lahustamiseks NaOH ja reguleerige pH väärtuseni 7.4. Lõpuks reguleerige kogumaht 50 ml-ni).

Kuidas eemaldada naatriumdeoksükolaat?

Naatriumdeoksükolaat eemaldati pärast trüptilist seedimist hapestamise teel, kasutades 0.5% sipelghape ja tsentrifuugimine 14 000 g juures (RA-300, Kubota 7820) 15 minutit toatemperatuuril.

Kas naatrium on desoksükolaat?

Naatriumdeoksükolaat (desoksükoolhape) on vees lahustuv, sapphappe ioonne detergent, mida tavaliselt kasutatakse valgumeetodites. ... Naatriumdeoksükolaat on detergent, mida soovitatakse endotoksiini (lipopolüsahhariidi või LPS) eemaldamiseks immobiliseeritud polümüksiin B kolonnidest.

Kas naatriumdesoksükolaat on denatureeritud?

Naatriumkolaat ja naatriumdesoksükolaat on tavaliselt kasutatavatest ioonpesuvahenditest kõige vähem denatureerivad. ... Kõrge mitsell-molekulmassiga detergente, nagu mitteioonsed detergendid, on raske dialüüsiga proovidest eemaldada.

Kas RIPA puhver ühildub Elisaga?

RayBioga kasutamiseks mõeldud raku- või koelüsaadid^® ELISA komplekte saab valmistada enamiku tavapäraste meetoditega, nt.g. raku või koe homogeniseerimine RayBio® lüüsipuhvris. Võite kasutada ka oma lüüsipuhvrit, näiteks RIPA-d või muid immunosadestamise jaoks optimeeritud preparaate.

Kuidas teha RIPA lüüsipuhvrit?

Kuidas valmistada RIPA lüüsipuhverlahust. Mõõtke välja 3 ml naatriumkloriidi (5 M), 5 ml Tris-HCl (1 M, pH 8.0), 1 ml nonidet P-40, 5 ml naatriumdesoksükolaati (10%), 1 ml SDS-i (10%) ja lisage 100 ml Durani pudelisse.

Mis on EDTA lüüsipuhvris?

Lüüsipuhver sisaldab etüleendiamiintetraäädikhapet (EDTA), kuna EDTA on metalli kelaatija. EDTA kelaadiks kahevalentsed katioonid nagu magneesium, tsink, mangaan, nikkel, vase ioonid jne, mis on paljude ensüümide, nagu DNAaasid ja proteaasid, kofaktorid.

Kuidas imetajate rakke lüüsida?

Bakteri- ja imetajarakkude lüüsimiseks kasutatakse tavaliselt külmutamise-sulatamise meetodit. See meetod hõlmab rakususpensiooni külmutamist kuivjää/etanoolivannis või sügavkülmas ja seejärel materjali sulatamist toatemperatuuril või 37 °C juures.

Miks lisatakse lüüsipuhvrisse DTT??

DTT-d kasutatakse redutseeriva ainena, et vältida oksüdatsioonikahjustusi. Seda kasutatakse peamiselt tsütoplasmaatiliste valkude eraldamisel.